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近日，最新發(fā)表在著名國(guó)際期刊《Veterinary Microbiology》上的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，非洲豬瘟病毒在水蛭體內(nèi)存活可達(dá)140天。

已有研究表明，ASFV可通過(guò)水源傳播。截止目前，水被ASFV污染的源頭仍不清楚，其中一個(gè)可能的因素是感染豬的糞便和尿液。然而，在沒(méi)有合適寄生物的情況下，ASFV在水中存活時(shí)間一般只有數(shù)天，是不可能在水中長(zhǎng)期存在的。因此，尋找可以攜帶和傳播非洲豬瘟病毒的水生生物顯得非常必要。在自然環(huán)境中，水蛭是細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)的重要宿主。早在1913年，Boynton等已發(fā)現(xiàn)它在牛瘟的傳播中具有重要作用。后續(xù)研究也發(fā)現(xiàn)，水蛭是動(dòng)物病毒的跨宿主傳播的載體之一。該研究對(duì)水蛭攜帶和分泌A(yíng)SFV的能力進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)水蛭分泌的ASFV的感染能力進(jìn)行了分析。

實(shí)驗(yàn)分組

將水蛭分為兩組。第一組的96條水蛭進(jìn)行ASFV的攜帶研究。在豬感染ASFV 6天左右，讓水蛭在感染豬的下腹部吸食血液，因?yàn)檫@個(gè)時(shí)期血液中的病毒載量相對(duì)較高。通過(guò)人為摘除，控制水蛭的吸食時(shí)間為10 min左右。同時(shí)用10條吸食過(guò)人血液的水蛭作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照。第二組的96條水蛭用來(lái)進(jìn)行ASFV的培養(yǎng)研究。將感染豬的脾臟提取物進(jìn)行稀釋后，以4.0 lg HADU₅₀/ml ASFV的濃度對(duì)該組水蛭進(jìn)行飼喂。同時(shí)用10條未進(jìn)食的水蛭作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照。模擬夏季的環(huán)境溫度，該研究中水蛭的培養(yǎng)條件為22℃–25℃ 80天，26℃–32℃ 60天，24℃–26℃ 60天。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)檢測(cè)水蛭的體液分泌物，該研究確認(rèn)了兩組的水蛭均攜帶了ASFV。在無(wú)水蛭的水環(huán)境對(duì)照中，HADU檢測(cè)結(jié)果顯示，ASFV在培養(yǎng)液中的失活與溫度密切相關(guān)。30℃避光條件下，ASFV可至少存活12-14天，最長(zhǎng)可達(dá)30-35天 （1 A）。PCR結(jié)果顯示，ASFV DNA在水環(huán)境中可存在至少3-5周（1B）。在水蛭實(shí)驗(yàn)組，HADU結(jié)果顯示，直到160天，有50%的水蛭體內(nèi)仍可檢測(cè)到ASFV（表2）。HADU結(jié)果顯示，我們發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始階段血液吸食組水蛭體內(nèi)的病毒含量高于脾臟提取物培養(yǎng)組。60-80天后，血液吸食組水蛭體內(nèi)的病毒含量開(kāi)始下降，但一直持續(xù)至160天左右（1C）。PCR方法與HADU方法的結(jié)果基本一致，ASFV DNA在血液吸食組水蛭體內(nèi)可存在150-160天，在脾臟提取物培養(yǎng)組水蛭體內(nèi)可存在140-150天（1D）。在水蛭實(shí)驗(yàn)組的培養(yǎng)液中，雖然ASFV滴度隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)有所下降，但直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，通過(guò)HADU和PCR方法均能檢測(cè)到ASFV的存在（1E和1F）。另外，結(jié)果顯示培養(yǎng)液沉淀物中的病毒拷貝數(shù)要明顯高于培養(yǎng)液。

為了測(cè)試水蛭攜帶ASFV的感染能力，培養(yǎng)130-160天后，該研究用水蛭實(shí)驗(yàn)組的培養(yǎng)液、水蛭提取物的10倍稀釋液對(duì)豬原代肺泡巨噬細(xì)胞進(jìn)行感染。HADU和PCR結(jié)果均顯示，接種后24-48 h病毒滴度明顯增加。

該研究進(jìn)一步測(cè)試了水蛭實(shí)驗(yàn)組攜帶的ASFV是否對(duì)豬具有感染能力，結(jié)果表明水蛭攜帶的ASFV通過(guò)口服途徑感染豬是可能的，但是這種現(xiàn)象不能被有規(guī)律的重復(fù)，特別是在實(shí)驗(yàn)的后期階段。從口服感染到發(fā)病，豬的潛伏期為12-15天，這與臨床數(shù)據(jù)非常相似。

該研究表明，在相對(duì)比較高的溫度條件下，水蛭體內(nèi)的ASFV可存活達(dá)140天。可以推測(cè)，如果在相對(duì)低的溫度條件下，該存活期可能會(huì)更長(zhǎng)。根據(jù)這個(gè)發(fā)現(xiàn)，我們認(rèn)為水蛭也是ASF流行的一個(gè)重要宿主。該發(fā)現(xiàn)對(duì)于放養(yǎng)豬和野豬的ASF季節(jié)性流行的原因，也提供了一個(gè)合理解釋。目前，水蛭可使病毒長(zhǎng)時(shí)間保持感染力的原因還不清楚，Al-Khleif等認(rèn)為水蛭體內(nèi)可能存在一些適合病毒生存的因子。病毒能夠在水蛭體內(nèi)存活并分泌到環(huán)境中，可能的原因是病毒能夠在水蛭的組織細(xì)胞、未消化的血液中復(fù)制，或者水蛭組織細(xì)胞具有長(zhǎng)期保存病毒的能力，并緩慢釋放。然而，ASFV不太可能在水蛭攝取的血液中進(jìn)行復(fù)制，因?yàn)閮山M間的病毒滴度接近。水蛭生長(zhǎng)的水中能檢測(cè)到ASFV，可能原因是它的分泌或排泄，該研究認(rèn)為水蛭可能在維持ASFV病毒活性方面具有重要作用。

2018年8月3日，我國(guó)發(fā)現(xiàn)首例非洲豬瘟疫情，隨后很快傳播到全國(guó)大部分地區(qū)，已經(jīng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于缺乏安全有效的疫苗，目前控制該病的唯一方法是實(shí)行嚴(yán)格的生物安全措施。因此，對(duì)ASFV的傳播途徑進(jìn)行深入研究，有助于提高生物安全防控意識(shí)，增強(qiáng)防控手段。水蛭作為多種細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)的重要宿主，在疫病傳播中具有不可忽視的作用。筆者認(rèn)為，本研究關(guān)于水蛭可攜帶ASFV的發(fā)現(xiàn)，揭示了ASFV可在水中長(zhǎng)期存在的一個(gè)重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，水源是ASFV跨區(qū)域傳播的一個(gè)重要因素，美國(guó)堪薩斯州立大學(xué)Niederwerder助理教授的研究小組發(fā)現(xiàn)，ASFV通過(guò)飲水引起感染的劑量很小，最低僅為100 TCID₅₀。我國(guó)地域遼闊，地理環(huán)境復(fù)雜，物種種類(lèi)多樣。已有相關(guān)數(shù)據(jù)表明，1959-2009年我國(guó)大陸的人體水蛭病病例數(shù)達(dá)1003例，主要分布于廣西、貴州、云南、福建、廣東、湖北、江西、浙江等15個(gè)省（區(qū)）。目前雖然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)水蛭與ASFV在我國(guó)迅速傳播的直接聯(lián)系，但根據(jù)該研究提供的數(shù)據(jù)，我們應(yīng)該提高警惕，重視養(yǎng)豬用水的凈化，同時(shí)加強(qiáng)周邊河流的監(jiān)管，禁止死豬入河，共同構(gòu)筑堅(jiān)實(shí)的生物安全屏障。

原文鏈接：

https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2019.108421

（譯者：勾紅潮，單位：廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所）