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劉芮祎：這是一項(xiàng)非常有益、及時(shí)而且十分有必要的政策�？梢哉f(shuō)現(xiàn)在開(kāi)展非洲豬瘟自檢工作已經(jīng)迫在眉睫，同時(shí)也是防控非洲豬瘟的前提與重中之重。目前防控非洲豬瘟，沒(méi)有疫苗，也沒(méi)有有效藥物，自檢成了非洲豬瘟防控的第一步，也是“自保”的前提！只有養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)做到自主檢測(cè)，才能了解非洲豬瘟防控的成效，做到有的放矢，心里更有數(shù)！

規(guī)范操作，避免操作污染

Q2.通過(guò)對(duì)豬場(chǎng)自檢指導(dǎo)工作以及開(kāi)展的非洲豬瘟檢測(cè)培訓(xùn)，您認(rèn)為豬場(chǎng)養(yǎng)戶(hù)們普遍存在哪些問(wèn)題？

劉芮祎：最主要的問(wèn)題是操作上“污染防控意識(shí)薄弱”。由于多數(shù)養(yǎng)殖戶(hù)以前沒(méi)有接觸過(guò)這樣的實(shí)驗(yàn)，操作流程技能不規(guī)范等，容易造成污染擴(kuò)散，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性等情況。

關(guān)于如何解決操作污染問(wèn)題，我們有以下措施建議：

1.“傻瓜式”培訓(xùn)。儀器設(shè)定好程序，現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)豬場(chǎng)員工掌握操作技能、流程步驟及判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.根據(jù)豬場(chǎng)具體情況建立（簡(jiǎn)易）實(shí)驗(yàn)室。需要有獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)，至少要保證樣本處理區(qū)與操作區(qū)分開(kāi)；需有通風(fēng)條件（可配超凈工作臺(tái)），避免內(nèi)部交叉污染循環(huán)。日常檢測(cè)結(jié)束使用95%的酒精或核酸去除劑對(duì)實(shí)驗(yàn)桌、儀器槍頭等進(jìn)行消毒。

3.對(duì)于實(shí)驗(yàn)區(qū)已出現(xiàn)污染問(wèn)題，可以更換基因序列（靶點(diǎn)）不同的試劑盒，同時(shí)確保通風(fēng)流暢。

規(guī)范化自檢操作流程與操作細(xì)節(jié)

Q3.日常監(jiān)測(cè)中，養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)該如何開(kāi)展非洲豬瘟自檢操作呢？有哪些規(guī)范化檢測(cè)流程以及操作細(xì)節(jié)可以分享？

劉芮祎：非洲豬瘟自檢流程與細(xì)節(jié)有以下幾點(diǎn)注意事項(xiàng)：

1.樣本來(lái)源要廣泛。采樣的樣本除了豬群本身，還應(yīng)包括豬場(chǎng)各個(gè)區(qū)域的環(huán)境、用具、員工、來(lái)往車(chē)輛、飼料原料等。

2.采樣方式要安全可靠。對(duì)于豬只本身的臨床樣本，建議使用“唾液樣本”進(jìn)行監(jiān)測(cè)和檢測(cè)。因?yàn)榉侵挢i瘟病毒在自然感染的情況下首先在口腔內(nèi)形成感染，病毒從口腔扁桃體進(jìn)入血液出現(xiàn)的平均時(shí)間是3-4天，最長(zhǎng)可達(dá)19天，也就是唾液可以早于血液至少3天被檢測(cè)出來(lái)，最早可以提前19天被檢測(cè)出來(lái)，這也是檢測(cè)的黃金窗口期，那這樣就給豬場(chǎng)進(jìn)行有效、及時(shí)處理贏得了大量的時(shí)間！如果在血液里面查出有病毒核酸陽(yáng)性，實(shí)際上豬已經(jīng)出現(xiàn)了比較嚴(yán)重的病毒血癥，再做任何處理都已經(jīng)來(lái)不及了，也就失去了檢測(cè)的生產(chǎn)指導(dǎo)意義。

3.采樣時(shí)間間隔要合理。應(yīng)根據(jù)豬場(chǎng)實(shí)際情況確定，種豬群一般建議一周至少2次，商品豬群一周1次，如果有賣(mài)豬等臨時(shí)行為，要對(duì)出豬臺(tái)、進(jìn)出人員等隨時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，環(huán)境檢測(cè)要做到一周2次左右。如果豬場(chǎng)周?chē)�有疫情發(fā)生的，則更要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)周期和頻率，做到隨時(shí)了解本豬場(chǎng)的病原及生物安全防控情況。

4.采樣數(shù)量要科學(xué)。對(duì)于臨床樣本數(shù)量，建議母豬分胎次，小豬分胎齡，育肥、保育以欄為單位進(jìn)行采樣，以及環(huán)境等各個(gè)區(qū)域（可以劃分小單元），每組取5份樣本混樣，公豬量少的可以全檢。這里需要注意，混樣樣本不建議份數(shù)太多。假若出現(xiàn)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果，再單獨(dú)對(duì)每一份樣本進(jìn)行溯源，目標(biāo)過(guò)于分散，耗時(shí)增長(zhǎng)。
“定向”選擇檢測(cè)“目標(biāo)”樣本

Q4:在檢測(cè)試劑與儀器的選擇上，您是否能給養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)們一些意見(jiàn)？

劉芮祎：首先，從非洲豬瘟病毒的存在形式上來(lái)說(shuō)，分為蛋白和核酸，所以可檢測(cè)的目標(biāo)物就從這兩個(gè)層面來(lái)入手。目前市面上有快速檢測(cè)試紙條，這屬于免疫層析的原理，檢測(cè)目標(biāo)為病毒的蛋白；還有一種方法是用熒光定量PCR儀，配合使用熒光定量PCR試劑盒，這是一種分子水平的診斷，這種方法檢測(cè)的是病毒的核酸。

在方法學(xué)上，兩種檢測(cè)方法都可以檢測(cè)病毒，但是靈敏度差異很大，熒光定量PCR的方法是目前最靈敏的方法，所以適合環(huán)境或者唾液樣本的檢測(cè)，還有豬場(chǎng)的日常監(jiān)測(cè)。而快速檢測(cè)試紙條屬于免疫學(xué)診斷方法，靈敏度相對(duì)較低，但是對(duì)于臨床上已有發(fā)病癥狀，肉眼通過(guò)癥狀不能確診的情況下，可以使用快速檢測(cè)試紙條來(lái)進(jìn)行快速的判斷，所以在臨床上如果遇到有緊急發(fā)病癥狀的時(shí)候，可以使用快速檢測(cè)試紙條。

Q5：近期，有關(guān)新聞報(bào)道（北京森康）非洲豬瘟抗原檢測(cè)試劑紙條檢測(cè)有假陰性的現(xiàn)象，對(duì)此您有何看法？

劉芮祎：最近也有很多朋友問(wèn)過(guò)我這個(gè)問(wèn)題，我也非常愿意分享我的觀點(diǎn)。

第一，方法學(xué)限制�？乖�快速檢測(cè)試紙條是免疫膠體金水平的檢測(cè)方法，檢測(cè)的是病毒的蛋白，這種方法的檢出率或者說(shuō)靈敏度偏低，換句話(huà)說(shuō)是檢測(cè)限（檢測(cè)閾值）較高，低病毒量不容易達(dá)到檢測(cè)限。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第一批非洲豬瘟現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)試劑評(píng)價(jià)結(jié)果目錄里，“森康快速檢測(cè)試紙條的診斷敏感性是66.67%、特異性100%”，同時(shí)注明非洲豬瘟快速檢測(cè)試劑條類(lèi)“僅用于�。ㄋ溃┴i現(xiàn)場(chǎng)快速初步檢測(cè)”。這句話(huà)本質(zhì)的含義是：病豬或者死豬的帶毒量已經(jīng)很高，更容易達(dá)到試紙條的檢測(cè)限，所以�。ㄋ溃┴i更容易檢測(cè)出來(lái)�？乖�快速檢測(cè)試紙條檢出率的高低取決于待檢豬的發(fā)病階段，如若是處于潛伏期的病豬，核酸檢測(cè)結(jié)果是陽(yáng)性，抗原快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)是陰性也是合理存在的。

這也提示我們可以通過(guò)“定向”選擇檢測(cè)“目標(biāo)”樣本，從而提高準(zhǔn)確率。針對(duì)豬群日常監(jiān)測(cè)與環(huán)境檢測(cè)，其帶毒量相對(duì)偏低，不容易達(dá)到檢測(cè)限，不推薦使用抗原快速檢測(cè)試紙條。

第二，合理存在假陰或者假陽(yáng)的可能性。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第一批備案目錄里部分熒光定量PCR試劑盒，診斷敏感性并不都是100%，也有93%或96%的情況�？乖�快速檢測(cè)試紙條與熒光定量PCR試劑盒敏感性指數(shù)的區(qū)別就是假陰或者假陽(yáng)比例的高低。所以我個(gè)人認(rèn)為每個(gè)產(chǎn)品都有它的優(yōu)缺點(diǎn)，而不能一棍子打死，就說(shuō)試紙條完全不準(zhǔn)確也不可取，關(guān)鍵還是要定向選擇檢測(cè)目標(biāo)樣本。

第三，正規(guī)渠道購(gòu)置檢測(cè)產(chǎn)品。市面上森康產(chǎn)品的價(jià)格參差不齊，在這也提醒過(guò)廣大用戶(hù)，不能一味的在意價(jià)格，而不注重產(chǎn)品質(zhì)量。請(qǐng)廣大客戶(hù)通過(guò)正規(guī)渠道購(gòu)置產(chǎn)品，保障自身利益。

關(guān)注豬群“內(nèi)在”健康體質(zhì)情況

Q6:唾液檢測(cè)在生豬健康度監(jiān)測(cè)上也備受關(guān)注，能否介紹生豬的健康體質(zhì)檢測(cè)？

劉芮祎：抵抗非洲豬瘟，除了做好“外在”的生物安全防控措施，還要注重豬“內(nèi)在”的健康體質(zhì)情況。通過(guò)對(duì)豬只健康度的評(píng)判，可以了解豬群免疫力情況，及時(shí)提高豬群免疫力，以提高抗病能力。

其中，我們有寒度檢測(cè)試劑盒和朊度檢測(cè)試劑盒。寒度檢測(cè)試劑盒主要檢測(cè)機(jī)體體內(nèi)毒素蓄積程度、免疫力水平或肝腎功能受損程度。朊度檢測(cè)試劑盒檢測(cè)機(jī)體的免疫能力。朊度即蛋白含量，代表機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)情況。

Q7：唾液檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)及唾液采集的注意事項(xiàng)主要有哪些？

劉芮祎：唾液學(xué)檢測(cè)有四大優(yōu)勢(shì)：1.唾液可以早于血液平均3~5天檢測(cè)出非洲豬瘟病毒，便于早期篩查；2.唾液采集操作簡(jiǎn)單方便，節(jié)省人力和物資；3.對(duì)豬無(wú)應(yīng)激，方便頻繁的臨床采樣；4.通過(guò)唾液樣本，可以進(jìn)行PCR檢測(cè)，進(jìn)一步確診是否為非洲豬瘟病毒感染。

唾液采樣有以下注意事項(xiàng)：1.采樣時(shí)間：控食過(guò)夜，前晚停料不停水，第二天早晨采食前采集唾液。這樣采集的唾液樣本純度高，病原含量高；2.要加入唾液保護(hù)液，否則唾液中的酶會(huì)對(duì)病毒核酸造成降解。3.采集出來(lái)的唾液樣本不能離心，離心沉淀后，上清液中的病毒量會(huì)降低。

Q8：在日常疫病監(jiān)測(cè)過(guò)程中，您認(rèn)為應(yīng)該注意哪環(huán)節(jié)？

劉芮祎：在日常疫病檢測(cè)監(jiān)測(cè)中，這幾方面需要注意：

1.非洲豬瘟病毒雖然毒力強(qiáng)，發(fā)病后死亡率高，但它也有弱點(diǎn)，病毒接觸傳播，不接觸就不傳播，這個(gè)點(diǎn)來(lái)說(shuō)其威力不及口蹄疫和豬高熱病。若非傳播媒介協(xié)助，自身傳播擴(kuò)散力度不是特別強(qiáng)。

2.非瘟感染豬清除一定要早：“早監(jiān)測(cè)、早發(fā)現(xiàn)、早處置”，及時(shí)“穩(wěn)、準(zhǔn)、狠”地清除病豬，不給病毒擴(kuò)散的機(jī)會(huì)，這樣才能保護(hù)健康豬群。

3.落實(shí)封閉飼養(yǎng)、全進(jìn)全出等飼養(yǎng)管理制度，禁止無(wú)關(guān)人員和車(chē)輛進(jìn)入場(chǎng)區(qū)；嚴(yán)格落實(shí)補(bǔ)欄隔離措施和空欄管理制度，避免交叉污染。

采編丨王麗珍