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眾所周知，豬高致病藍(lán)耳病病毒（HP-PRRSV）是危害我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要病原之一。2006年的“高熱病”疫情在爆發(fā)初期就造成超過(guò)100萬(wàn)頭豬只死亡，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成重創(chuàng)。近年來(lái)，高致病藍(lán)耳病（HP-PRRSV）在豬場(chǎng)又有抬頭趨勢(shì)，嚴(yán)重影響著豬群的健康水平。有學(xué)者證實(shí)我國(guó)藍(lán)耳病流行發(fā)生新的變化。其中，2015年10月哈爾濱獸醫(yī)研究所動(dòng)物病原監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)研究團(tuán)隊(duì)就在《Journal of Virology》期刊發(fā)文首次證實(shí)2013-2014年中國(guó)已出現(xiàn)新的變異HP-PRRSV毒株，并在吉林、黑龍江等幾個(gè)省份傳播擴(kuò)散，吉林省感染豬場(chǎng)的發(fā)病率為100％，死亡率為76.6％（230/300），說(shuō)明該毒株致病性和致死率都很高。該重組HP-PRRSV同樣由北美流行毒株類(lèi)NADC30株與國(guó)內(nèi)HP-PRRSV毒株進(jìn)行遺傳重組而成。但該重組變異株具有很強(qiáng)的致病性。另外，2017年6月中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院副院長(zhǎng)楊漢春博士團(tuán)隊(duì)在《Infection, Genetics and Evolution》期刊上發(fā)表文章指出：重組2型PRRSV（稱(chēng)為T(mén)Jnh1501）是由中國(guó)HP-PRRSV變異株類(lèi)MLV與類(lèi)NADC30發(fā)生重組后具有中等毒力的毒株已在中國(guó)開(kāi)始傳播。因此要重視藍(lán)耳病流行的新變化，科學(xué)防控走出誤區(qū)。

1、重組HP-PRRSV毒株遺傳表征

哈爾濱獸醫(yī)研究所動(dòng)物病原監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)研究團(tuán)隊(duì)從吉林省、黑龍江省兩個(gè)農(nóng)場(chǎng)中分離得到具有代表性的JL580和HLJ58的開(kāi)放閱讀框5（ORF5）序列。使用PhyML 3.0版軟件建立進(jìn)化樹(shù)分析，結(jié)果表明：這些病毒與中國(guó)傳統(tǒng)的HP-PRRSV毒株相關(guān)性不大，屬于譜系8（圖1A）。相反，它們深深地嵌套在起源于加拿大，現(xiàn)在在美國(guó)和加拿大都很普遍流行的多樣化譜系1中。值得一提的是，該毒株也與2008年美國(guó)分離得到的中等毒力毒株NADC30具有一定的相關(guān)性。此外，分析這種變異HP-PRRSV多樣性的結(jié)構(gòu)表明，從時(shí)間上推斷該毒株是從加拿大到美國(guó)，然后到傳入中國(guó)（圖1B）。在中國(guó)，新的HP-PRRSV毒株不僅影響吉林和黑龍江，而且已波及到華中和華南地區(qū)，其中分離的毒株包括HENAN-XINX（登錄號(hào)KF416327至KF416329），HENAN-HEB（KF416334），HENAN-JIAOZKF416333）和FJ1405（KM453701）。

在研究該病毒的遺傳表征上，采用Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)，分離得到JL580毒株并對(duì)PRRSV N蛋白單克隆抗體進(jìn)行免疫熒光測(cè)定。序列比對(duì)顯示：該變異株在非結(jié)構(gòu)蛋白2（nsp2）中有三個(gè)間斷不連續(xù)缺失（總共131個(gè)氨基酸），這與NADC30和MN184毒株相似但與中國(guó)傳統(tǒng)HP-PRRSV毒株不同（圖1C）。這些缺失可以用作分子標(biāo)記，以區(qū)分類(lèi)JL580 HP-PRRSV毒株和其他2型PRRSV毒株。重要的是，在ORF5區(qū)域，大部分變異氨基酸位于蛋白質(zhì)的可變區(qū)，這說(shuō)明JL580與中等毒力的NADC30更接近（圖1D）。

在重組試驗(yàn)中，利用SimPlot v3.5.1軟件對(duì)基因組500-bp進(jìn)行同源重組比較。結(jié)果顯示：JL580是類(lèi)NADC30毒株與中國(guó)經(jīng)典HP-PRRSV毒株重組的結(jié)果（圖2A）。圖譜顯示存在6個(gè)重組斷點(diǎn)：兩個(gè)位于nsp2（核苷酸[nt] 3446和4549），其他位于nsp3（nt 5225），nsp7（nt 7244），ORF2a（nt 12572）和ORF4（nt 13648）。這些斷點(diǎn)將基因組分為七個(gè)區(qū)域：四個(gè)與來(lái)自北美的PRRSV毒株（由NADC30代表）相同（圖2B），其余三個(gè)與中國(guó)經(jīng)典HP-PRRSV毒株密切相關(guān)（圖2C）。這表明該毒株從美國(guó)傳入后，與中國(guó)經(jīng)典的HP-PRRSV毒株重組而獲得遺傳多樣性。

2、重組HP-PRRSV致病性研究

哈獸研針對(duì)JL580的致病性試驗(yàn)：將14只6周齡PRRSV陰性仔豬隨機(jī)分為3組，于生物安全實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)。A組仔豬（n = 5）：用JL580-F2（Marc-145傳代細(xì)胞培養(yǎng)3 ϫ 104.0 50％病毒感染量[TCID50]，肌內(nèi)（1ml）和鼻內(nèi)（2ml）接種，共3ml/只）。B組仔豬（n = 5）：用JL580勻漿上清液（經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾、PT-PCR確定不含有偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒、經(jīng)典豬瘟病毒或2型豬圓環(huán)病毒感染），每只豬的JL580-F2感染量為3 ϫ 104.0拷貝。C組仔豬（n = 4）：模擬Dulbecco's改良Eagle's的方法，3ml/只進(jìn)行注射。每天對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行觀察記錄。定期（感染后0、3、7、10和14天）采集血樣，觀察結(jié)果顯示：A組和B組仔豬從第3天開(kāi)始發(fā)熱（圖3A），并伴有明顯的咳嗽、厭食和身體紅斑和耳朵發(fā)紺的臨床癥狀；A組和B組的仔豬分別在7~10天和10~14天內(nèi)死亡（圖3B）。在第3、7和10天收集的血清樣品檢測(cè)PRRSV呈陽(yáng)性，從A組和B組的血清中對(duì)該病毒重新進(jìn)行分離鑒定，并對(duì)ORF5區(qū)域進(jìn)行測(cè)序以確認(rèn)其原始病毒。對(duì)照組仔豬整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程沒(méi)有明顯的臨床癥狀。病理剖檢結(jié)果顯示肺部病變明顯（圖4C），鏡下呈間質(zhì)性肺炎（圖4E）。試驗(yàn)結(jié)論：JL580的致病性比類(lèi)NADC30和CH-1a株要高，與國(guó)內(nèi)HP-PRRSV相類(lèi)似。

3、現(xiàn)有疫苗依然是防控重組HP-PRRSV的有效手段

重組HP-PRRSV終究是一種PRRS病毒，對(duì)于重組HP-PRRSV的防控不需要引起恐慌，從PRRSV防控歷史來(lái)看，新的毒株層出不窮，PRRS疫苗的不可能蓋其所有，只要交叉保護(hù)力好，達(dá)到防疫效果不成問(wèn)題。對(duì)于藍(lán)耳病應(yīng)繼續(xù)保持綜合防控的理念：對(duì)內(nèi)通過(guò)疫苗免疫和生物安全降低病毒的循環(huán)；對(duì)外做好生物安全和引種管理。降低病毒在場(chǎng)內(nèi)的循環(huán)，除了良好的生物安全和豬群流動(dòng)的管理辦法（全進(jìn)全出、清群等管理模式），疫苗防疫是非常簡(jiǎn)單實(shí)用的操作手段。

來(lái)源：哈獸維科