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2017年1月份至6月份，廣東永順生物制藥股份有限公司客戶服務(wù)部從全國(guó)各地送檢的156個(gè)豬場(chǎng)共380份樣品當(dāng)中，檢測(cè)到藍(lán)耳病病毒核酸陽(yáng)性有78個(gè)豬場(chǎng)，一共133份樣品，即藍(lán)耳病原場(chǎng)陽(yáng)性率為50%（78/156），樣品陽(yáng)性率為35%（133/380），可見目前豬場(chǎng)的藍(lán)耳帶毒排毒現(xiàn)象非常普遍。檢測(cè)結(jié)果詳細(xì)介紹如下：

參照GB/T 18090-2008 豬繁殖與呼吸綜合診斷方法和GB/T 27517-2011 鑒別豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病性與經(jīng)典毒株復(fù)合RT-PCR方法，以及從NCBI下載藍(lán)耳毒株的基因（組）序列，分別針對(duì)藍(lán)耳病病毒N基因、nsp2基因和gp5基因設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)全國(guó)各地豬場(chǎng)病料（含血清）中的藍(lán)耳病病毒進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。針對(duì)N基因（ORF7）的引物為：P1：5’-GCG GAT CCA TGC CAA ATA ACA AC-3’、P2：5’-AGC TCG AGT CAT GCT GAG GGT GA-3’，擴(kuò)增片段為372bp。針對(duì)nsp2基因的引物為：P3：5’-GGT TCG GAA GAA ACT GTC GG -3’、P4：5’-AGC AGG TGG AAG AAG CGA ATC -3’、P5：5’-GAG CTG AGT ATT TTG GGC GTG-3’，P3/P5引物對(duì)擴(kuò)增片段為400bp可判為變異株，P4/P5引物對(duì)擴(kuò)增片段為264bp可判為經(jīng)典株。

2017年1月份至6月份藍(lán)耳病原樣品陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)見表1和圖1，發(fā)現(xiàn)藍(lán)耳病原樣品陽(yáng)性率在15.6%至49.3%之間變化，上半年平均來(lái)看可以說(shuō)三份樣品當(dāng)中大概就有一份是藍(lán)耳病原陽(yáng)性，可謂是“藍(lán)天之下一片藍(lán)”呀！

當(dāng)然，如果計(jì)算藍(lán)耳病原陽(yáng)性場(chǎng)的陽(yáng)性率，結(jié)果還會(huì)更高一些；如果計(jì)算藍(lán)耳抗體陽(yáng)性場(chǎng)的陽(yáng)性率，估計(jì)結(jié)果更會(huì)再高出許多。2017年1月份至6月份藍(lán)耳病原陽(yáng)性場(chǎng)的陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)見表2和圖2。從圖表可知，上半年剛好有一半的豬場(chǎng)是藍(lán)耳病原陽(yáng)性場(chǎng)�？梢�，藍(lán)耳病病毒已經(jīng)普遍在豬場(chǎng)里面“定居”，當(dāng)然，也不排除有部分病毒是疫苗毒，畢竟藍(lán)耳活疫苗免疫后也可以在血液以及組織器官里面出現(xiàn)比較長(zhǎng)時(shí)間。

將上半年的藍(lán)耳病原陽(yáng)性樣品進(jìn)行送樣測(cè)序，成功測(cè)定了共97株藍(lán)耳病病毒的gp5序列。應(yīng)用DNAStar軟件把該97株gp5基因序列和美洲型變異株、國(guó)內(nèi)經(jīng)典株、美國(guó)經(jīng)典株、GM2類重組毒株、NADC-30類毒株以及歐洲型毒株相應(yīng)的gp5基因序列進(jìn)行分析和比較，并利用MEGA 6軟件繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹（見圖3）。

將該97株序列按省份、分型來(lái)列表，可見變異株有61株，GM2類重組毒株有25株，NADC-30類毒株有11株。（見表3、圖4~7）

一般來(lái)說(shuō)，根據(jù)nsp2基因是否缺失90個(gè)核苷酸來(lái)判斷是否高致病性藍(lán)耳病毒株，但反向遺傳早已顯示是否缺失該90個(gè)核苷酸與毒力沒有必然聯(lián)系，因此建議高致病性毒株改稱為“變異株”更為合適。從2017年上半年藍(lán)耳毒株測(cè)序分型統(tǒng)計(jì)圖表可知，當(dāng)前流行的藍(lán)耳毒株是以變異株為主流。但是，由于當(dāng)前使用藍(lán)耳變異株活疫苗，因此不能完全排除檢測(cè)到疫苗株的可能。NADC-30類毒株主要集中在華北平原，但東北、廣東也有出現(xiàn)，其流行范圍增大了；GM2類重組毒株盤踞廣東，在東北也有發(fā)現(xiàn)，其流行范圍也已變廣了。

在豬場(chǎng)藍(lán)耳有波動(dòng)的情況下，建議感染前免疫安全性好的活疫苗，當(dāng)然要避免潛伏期免疫。然而，藍(lán)耳病毒往往和其他病原混合感染，用“潮流術(shù)語(yǔ)”稱為“藍(lán)耳+”，其防控難在免疫藍(lán)耳活苗可能激發(fā)處于潛伏期的其他病暴發(fā)，應(yīng)引起高度重視。

來(lái)源：永順人生

作者：何柳芬、鐘植文

原標(biāo)題：豬藍(lán)耳病原2017年上半年檢測(cè)情況